CA 125 एक एक-चरणीय इम्यूनोपरख है, जो सैंडविच विधि के सिद्धांत पर आधारित है। परख प्रणाली बरकरार सीए 125 अणु पर एक विशिष्ट एंटीजेनिक निर्धारक के खिलाफ निर्देशित उच्च आत्मीयता और विशिष्टता मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एंजाइम संयुग्मित और स्थिर) का उपयोग करती है। दो एंटीबॉडी, जिसके परिणामस्वरूप सीए 125 अणु ठोस चरण और एंजाइम-लिंक्ड एंटीबॉडी के बीच सैंडविच हो जाते हैं।
अनबाउंड घटकों को धोने से हटा दिया जाता है। टीएमबी और हाइड्रोजन पेरोक्साइड युक्त घोल मिलाने के बाद, बाध्य संयुग्म वाले कुओं में एक नीला रंग विकसित होता है जो सल्फ्यूरिक एसिड के साथ प्रतिक्रिया बंद होने के बाद पीले रंग में बदल जाता है। रंग की तीव्रता नमूने में सीए 125 की सांद्रता के सीधे आनुपातिक है और इसे 450 एनएम पर पढ़ा जा सकता है।
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